日前《*肺炎诊疗方案(试行第六版)》正式发布,确诊病例需有病原学证据阳性结果(实时荧光rt-pcr检测*核酸阳性;或病毒基因测序,与已知的*高度同源)。另外,相比此前版本,新版增加了covid-19的传播途径存在气溶胶传播的可能。
这种可能性对我们做核酸检测的科研人员来说威胁性又大大升级了,毋庸置疑,核酸检测是covid-19*诊断的金标准,结合临床ct诊断方式,已得到我国临床专家的支持。
那么我们在做核酸检测时,样本处理应该注意什么事项?怎样操作可以尽可能地减少气溶胶的产生呢?小艾在此整理了一些注意事项献给我们的一线科研工作者们。
样品的灭活处理
对送检样本进行56℃下30分钟的灭活,灭活后的样本管需在生物安全柜内打开内层的容器,将拭子保存液混匀后进行分装和用于核酸提取。在此,小艾提醒各位科研工作者,千万不要以为灭活后就可以掉以轻心,病毒灭活效果与其所在基质成分有关,因实验条件所限,我们无法评估该方法灭活病毒的真实效果。此外,我们选择灭活后建议再静置10 min至室温,理论上来说,静置的时间越长,产生气溶胶的风险越小。基于此,灭活处理后的样本仍视为具有感染性,其后续处理应视同未灭活的样本。
ika icc basic pro 20 c 浸入式加热循环器适合水浴灭活处理,z高可将液体加热至 150 °c。适合在开放式或有盖热浴容器中使用。集成了强劲速度调节式压力/抽吸泵,确保浴槽内各个角落温度保持高度均一,温度均一性高达+/-0.2°c。不锈钢浴槽易于清洁,清洁*,耐化学腐蚀,可用 75%乙醇消毒灭菌。
ika dry block heater 干浴器适合空气灭活处理,随机配置pt-1000温度传感器可直接对容器内的样品进行控温。它可用于对 pcr 管,pcr 联管,greiner管,微孔板和比色皿进行精确加热。无级调温,z高可达120 °c。定时功能: 可倒计时, 时间范围为1 s - 99h 59min。
ika干浴器有丰富的多样的加热块,可根据病毒*尺寸选择。
ika oven 125 control 系列功能强大,125l内部空间满足同时处理大量样本的需求。快速加热和精确的温度调节保证了用户对质量控制或可重现结果的要求。高质量的绝缘,可减少气体排放和运行成本,并确保了较佳的温度均匀性。
样本的核酸提取
在样本的裂解,洗脱,提取全过程中,需要频繁使用移液器,振荡器,离心机。小艾建议各位科研工作者,在这整个过程中,尽量动作轻柔,小心,避免可能会抑制后续pcr反应的操作,避免气溶胶的产生。
ika pette 系列移液器分单道固定和可调移液器,圆锥吸头抗冲击、抗紫外线和抗化学腐蚀,确保提供*可靠的移液工作。标配3个不同材质及大小的把手,小艾个人感觉软把手特别适合频繁移液的操作,减轻手部负担。
此外,ika pette移液器可整支高压灭菌,避免交叉污染导致假阳性。小艾提醒各位科研工作者注意移液操作规范,移液速度,枪头浸入深度,详细可参考小艾分享的移液器操作注意事项,缓慢移液,有利于避免气溶胶。
ika g-l离心机特别适用于分子生物学领域,*安全保护功能,标配金属转子和盖子, 只有在盖子*密闭的情况下,才能开启运行,严防离心管意外破碎形成气溶胶对科研人员的影响。
ika 提供多款高质量涡旋振荡器,小艾建议尽量选择速度可调式,根据实际需要设定合适转速,避免气溶胶。
总而言之,核酸提取全过程需要注意的地方繁多,但我们只要做好三级防护,按操作规程正确操作,提高个人防护意识,实验后的消毒清洁,既可确保个人人身安全。
[参考文献]
1.《*感染的肺炎诊疗方案(试行第六版)》
2.《卫生健康委办公厅关于印发*感染的肺炎防控方案(第三版)》(国卫办疾控函[2020]80号)
3.《*实验室生物安全指南(第二版)》(国卫办科教函[2020]70号)
4. 华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科*流行地区临床实验室常见问题解答(*版)